lymfomem B-buněk 2 a proteinem endoplazmatického retikula 

inolab

lymfomem B-buněk 2 a proteinem endoplazmatického retikula 

Spc1 reguluje zpracování membránových proteinů zprostředkované signální peptidázou

Signální peptidáza (SPáza) štěpí signální sekvence (SS) sekrečních prekurzorů. Obsahuje evolučně konzervovanou membránovou proteinovou podjednotku Spc1, která je postrádatelná professional katalytickou aktivitu SPázy, a její position zůstává neznámá. V této studii jsme zkoumali funkci kvasinek Spc1. Nejprve jsme nastavili in vivo check štěpení SPázou pomocí variant sekrečního proteinu CPY s SS modifikovanými v oblastech n a h.

Při porovnání účinnosti štěpení SS těchto variant v buňkách s nebo bez Spc1 jsme zjistili, že sekvence ukotvené signálem se staly náchylnější ok štěpení pomocí SPase bez Spc1. Dále bylo SPASEM zprostředkované zpracování modelových membránových proteinů zvýšeno v nepřítomnosti, ale sníženo při nadměrné expresi Spc1. Spc1 byl koimunoprecipitován s proteiny nesoucími neštěpené segmenty ukotvené v signálu nebo transmembránové (TM).

Dohromady tyto výsledky naznačují, že Spc1 chrání segmenty TM před působením SPázy, čímž zaostřuje výběr substrátu professional SPázu a působí jako negativní regulátor professional zpracování membránových proteinů zprostředkovaných SPázou .

Interleukin 10 hraje důležitou roli u novorozeneckých potkanů ​​s hypoxickou ischemií spojenou s lymfomem B-buněk 2 a proteinem endoplazmatického retikula   29

 

Interleukin 10 (IL-10) je syntetický inhibitor lidských cytokinů s imunomodulačními a protizánětlivými účinky. Tato studie byla navržena tak, aby zkoumala variaci exprese IL-10 na mnoha místech včetně kortexu, hipokampu a plicních tkání novorozeneckých hypoxicko-ischemických (HI) potkanů ​​a prozkoumala klíčovou roli IL-10 při zmírňování poškození mozku HI. V této studii byly novorozenecké krysy Sprague-Dawley vystaveny pravé společné ligaci krční tepny, po které následovaly 2 hodiny hypoxie.

Exprese IL-10 v kůře, hipokampu a plicních tkáních byla měřena pomocí imunohistochemie, kvantitativní polymerázové řetězové reakce v reálném čase (RT-qPCR) a Western blotu (WB). Bylo provedeno dvojité imunofluorescenční barvení, aby se pozorovala lokalizace IL-10 v neuronech a astrocytech. Kromě toho byly ne-cílení a cílení IL-10 siRNA lentivirové vektory injikovány krysám ze skupiny s negativní kontrolou (NC) a IL-10 a hladiny mRNA B-buněčného lymfomu 2 (Bcl-2) a endoplazmatických retikulární protein 29 (ERp29) byly detekovány RT-qPCR po tichu IL-10.

Výsledky prokázaly, že exprese IL-10 byla výrazně zvýšena poté, co byly HI a IL-10 kolokalizovány neurony a astrocyty, které byly těžce poškozeny HI urážkou. Kromě toho byly Bcl-2 a ERp29 pozoruhodně sníženy po interferenci s IL-10 mRNA ve srovnání s NC skupinou. Naše nálezy odhalily, že IL-10 vyvíjel své antiapoptotické a neuroprotektivní účinky regulací exprese Bcl-2 a ERp29, což naznačuje, že IL-10 může být slibným cílem molekuly professional léčbu HIE.

inolab
inolab

Multiplexovaná a vysoce výkonná detekce bez značení biomarkerů RNA / Spike  Protein / IgG / IgM infekce SARS-CoV-2 s využitím nanoplasmonických biosenzorů

Okay řešení ohniska COVID-19, které je způsobeno těžkým akutním respiračním syndromem koronaviru 2 (SARS-CoV-2), existuje nesplněná potřeba vysoce přesných diagnostických testů ve všech fázích infekce s rychlými výsledky a vysokou specificitou. Zde představujeme multiplexní screeningový check na bázi nanoplasmonických biosenzorů professional COVID-19, který dokáže kvantitativně detekovat 10 různých biomarkerů (6 genů virové nukleové kyseliny, 2 podjednotky špičkových proteinů a 2 protilátky) s limitem detekce v řada aM, vše v rámci jedné platformy biosenzoru.

Naše nově vyvinuté nanoplazmonické biosenzory vykazují vysokou specificitu, která je nanejvýš důležitá, aby se zabránilo falešným reakcím. Jako důkaz konceptu ukazujeme, že náš detekční přístup má potenciál kvantifikovat jak IgG, tak IgM protilátky přímo ze vzorků plazmy pacientů pozitivních na COVID-19 v jediném běhu nástroje, což dokazuje vysokou propustnost našeho detekčního přístupu. Nejdůležitější je, že náš check poskytuje provozní provozní charakteristiky, oblasti pod křivkou 0,997 a 0,999 professional IgG, respektive IgM. Vypočtená  p- hodnota stanovená pomocí Mann-Whitneyho neparametrického testu je <0,0001 professional obě protilátky, když je check pacientů pozitivních na COVID-19 ( n = 80) ve srovnání se zdravými jedinci ( n  = 72).

Screeningový check navíc poskytuje vypočítanou citlivost (skutečná pozitivní míra) 100% (80/80), specificita (skutečná negativní míra)> 96% (77/80) , pozitivní prediktivní hodnota 98% při 5% prevalenci a negativní prediktivní hodnota 100% při 5% prevalenci. Věříme, že náš velmi citlivý, multiplexní a vysoce výkonný testovací přístup má potenciální aplikace v diagnostice COVID-19 , zejména při určování progrese viru a závažnosti infekce professional klinické lékaře professional vhodnou léčbu, a také se ukáže jako velmi účinný diagnostický check, když aplikován na nemoci mimo pandemii COVID-19.

Přesnost alternativních nepolarizovatelných silových polí professional stanovení vazebných vazeb na  proteiny a ligandy dominované interakcemi kation-π

Úprava parametrů Lennard-Jonesových parametrů specifických professional pár pomocí funkce nespojeného FIX (NBFIX) silového pole CHARMM36 se ukázala jako nákladově efektivní professional zlepšení popisu interakcí kation-π v biologických objektech pomocí funkcí párové aditivní potenciální energie. Zde se používají dvě sady nově optimalizovaných parametrů silového pole CHARMM36, včetně korekcí NBFIX, vytvořených CHARMM36m-NBF a CHARMM36-WYF, a původní silová pole, jmenovitě CHARMM36m a Amber ff14SB, ok určení standardní vazebné volné energie sedmi proteinových ligandové komplexy obsahující interakce kation-π.

Ve srovnání s přesnými experimentálními měřeními naše výsledky naznačují, že nekorigovaná původní silová pole významně podceňují vazebné volné energie se střední chybou 5,Three kcal / mol, zatímco střední chyby CHARMM36m-NBF a CHARMM36-WYF dosahují 0,eight a 2,1 kcal / mol. Tato studie kogentně demonstruje, že použití modifikovaných parametrů společně s korekcemi NBFIX dramaticky zvyšuje přesnost standardní vazebné volné energie komplexů protein-ligand, kterým dominují interakce kation-n, zejména u CHARMM36m-NBF.

Využití časově rozlišeného  zesílení fluorescence indukované proteiny ok identifikaci stabilních lokálních konformací jeden monomer α-synukleinu najednou

Použití spektroskopických pravítek ke sledování více konformací jednotlivých biomolekul a jejich dynamiky přineslo revoluci v chápání strukturní dynamiky a jejích příspěvků ok biologii. Zatímco pravítko založené na FRET hlásí vzdálenosti mezi barvivy v rozsahu 3 – 10 nm, jiné spektroskopické techniky, jako je zesílení fluorescence indukované proteinem (PIFE), hlásí blízkost mezi barvivem a povrchem proteinu v kratší Zero Rozsah -Three nm. Bez ohledu na zvolenou metodu jeho použití při měření volně difundujících biomolekul po jednom načítá histogramy experimentálního parametru, čímž se získávají samostatné centrálně distribuované subpopulace biomolekul, kde každá subpopulace představujebuď jedna konformace, která zůstala nezměněna během milisekund, nebo více konformací, které se převádějí mnohem rychleji než milisekundy, a tudíž průměrná subpopulace.

U FRET s jednou molekulou, kde uváděným parametrem v histogramech je účinnost FRET mezi barvivy, byl vnitřně narušený protein, jako je monomer α-Synuclein v pufru, dříve uváděn jako vykazující jednu průměrnou subpopulaci více konformace se rychle převádějí. Zatímco tato minulá zjištění závisí na rozsahu 3 – 10 nm pravítka založeného na FRET, snažili jsme se tento protein otestovat pomocí jednomolekulárního PIFE, kde sledujeme životnost fluorescence místně specifického sCy3 značeného α-Synucleinu bílkoviny jeden po druhém.

Je zajímavé, že s použitím tohoto spektroskopického senzoru přiblížení s kratším dosahem vykazuje s-Cynu-značený α-Synuclein několik celoživotních subpopulací se zřetelně odlišnými průměrnými délkami života, které se interkonvertují za 10-100 ms.Tyto výsledky ukazují, že zatímco α-Synuclein může být narušen globálně, přesto dosahuje stabilních lokálních struktur. Stručně řečeno, v této práci zdůrazňujeme výhodu použití různých spektroskopických přibližovacích senzorů, které sledují lokální nebo globální strukturální změny jedné biomolekuly najednou.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *